Na determinação diferencial de enterobactérias e alguns vibrios, a reação de Voges-Proskauer ocupa um lugar especial. O teste é baseado na capacidade das bactérias de fermentar glicose para formar acetoína.
A essência do processo de pesquisa
Em microbiologia, a reação de Voges-Proskauer é frequentemente usada para diferenciar dentro da família Yersinia de enterobactérias (incluindo os patógenos de pseudotuberculose e enterocolite), Escherichia coli e aeróbios formadores de esporos. O resultado é visualizado colorindo o meio quando certos reagentes são adicionados.
Este teste pertence à série IMViC (abreviatura de Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - um grupo de testes de identificação incluindo definições diferenciais:
- com indol, baseado na quebra do triptofano em indol, usado na presença de um reagente de Kovacs ou Ehrlich;
- usandometilroth, ou vermelho de metila, que detecta um determinado pH como resultado da metabolização da glicose;
- Reações de Voges-Proskauer para a detecção de acetil-metilcarbinol;
- utilização de citrato com mudança de cor como resultado da alcalinização do meio.
A essência do processo é a visualização da presença de bactérias diagnosticadas devido à interação da acetoína formada por elas com a potassa cáustica na presença de oxigênio. Acetil-metilcarbinol é oxidado a diacetil, que forma um composto vermelho ou rosa brilhante. Aumente a sensibilidade do teste introduzindo alfa-naftol antes de adicionar potassa cáustica.
Configuração de teste
A formulação da reação de Voges-Proskauer envolve o cultivo preliminar de microrganismos. Uma cultura pura é semeada no meio de diagnóstico diferencial de Clark, cuja variação é o caldo de Clark (sem adição de ágar-ágar). O meio pronto é usado ou preparado independentemente. Os ingredientes incluem:
- 5g de peptona;
- 5g glicose;
- 5g de fosfato de potássio dibásico;
- 1L destilado.
Durante o estudo, a cultura é inoculada com uma alça bacteriológica estéril em meio líquido. Quantidade - 5 ml em tubo de ensaio mais controle. A incubação é realizada a uma temperatura de 35-37 graus por dois dias. A seguir, um estudo da reação de Voges-Proskauer é realizado em etapas:
- 2, 5 ml de cultura de caldo são transferidos para um tubo estéril.
- Adicione seis gotas de alfa-naftol (solução alcoólica a 5%).
- Adicionar 40%uma solução de potássio cáustico na quantidade de 0,1 ml, ou duas gotas.
- A agitação é realizada agitando suavemente o tubo de ensaio.
- Avalie o resultado após 15 minutos do início do experimento.
Um método de teste alternativo é a incubação durante a noite, cujo tempo é reduzido para 18 horas ou até um dia. Além deste método, também é usado um teste expresso: uma cultura é introduzida em uma alça em 2 ml do meio, incubada por cerca de quatro horas, depois os reagentes são adicionados em uma quantidade igual de 2-3 gotas, misturados e o o resultado é avaliado após dez minutos.
O controle é um dos agentes causadores da pneumonia Klebsiella pneumoniae - cepa atcc 13883.
Avaliação do resultado
Após o tempo necessário após a adição dos reagentes (de 5 a 15 minutos), deve-se observar uma coloração vermelho cereja com reação positiva pronunciada, vermelho e rosa - com reação positiva fraca. Nenhuma alteração é registrada como resultado negativo.
Excesso de potassa cáustica em uma solução pode dar uma imitação de uma reação positiva, coloração na cor cobre. Neste caso, a resposta negativa da colônia testada deve ser registrada. Além disso, a coloração de cobre aparece nos casos em que a avaliação é feita uma hora após a introdução dos reagentes.
Ao avaliar o resultado, deve-se levar em consideração que o cultivo prolongado dos microrganismos estudados (mais de três dias) leva à acidificação do meio, o que pode levar a um resultado incorreto do estudo. A reação pode ser levemente positiva oufalso negativo.
Requisitos para reagentes de teste
Os reagentes Voges-Proskauer devem atender a requisitos como concentração correta, alta pureza e estabilidade, que são alcançadas por meio de armazenamento adequado.
Os kits de teste prontos para uso geralmente contêm reagentes para 100 ou mais usos e vêm em frascos de plástico ou vidro colorido. A qualidade é regulada pela documentação relevante.
