A variedade de infecções bacterianas requer uma identificação clara do patógeno e a definição de sua espécie. Para determinar o tipo de microrganismo, os microbiologistas são ajudados por suas propriedades tintoriais - a suscetibilidade do micróbio à coloração com vários corantes. Este método permite explorar a morfologia do patógeno. As propriedades tintométricas das bactérias são de grande importância para pesquisas práticas e teóricas na área de microbiologia.
Pesquisa microbiana
Em bacteriologia, existem muitos métodos para coloração de microrganismos. Todos eles são baseados nas propriedades tintoriais das bactérias. A coloração permite determinar sua forma, estrutura, tamanho, posição relativa. Isso permite resolver os problemas de sistematização dos tipos de microrganismos de biologia geral e microbiologia comparativa.
Por que pintá-los
As bactérias são praticamenteorganismos transparentes, e sem o uso de coloração, são pouco visíveis à microscopia convencional. Você pode usar tipos especiais de microscopia (contraste de fase, campo escuro) para estudar objetos, mas a maneira mais fácil é manchar, após o que as bactérias se tornam visíveis em um microscópio de luz convencional.
Preparação da amostra
Independentemente da técnica de coloração utilizada, existem regras uniformes para a preparação do objeto em estudo. As seguintes etapas são obrigatórias:
- Instrumentos estéreis fazem um esfregaço em uma lâmina de vidro.
- A amostra está sendo seca. Isso é feito à temperatura ambiente ou usando armários de secagem.
- Seguido da etapa de fixação - os microrganismos são fixados ao vidro com compostos especiais.
- Coração adequada - a amostra é coberta com corante por um período de tempo fixo, após o que é lavada.
- Secagem final - a amostra é seca novamente.
Os corantes mais comuns
Os corantes mais utilizados são à base de anilina com diferentes valores de acidez (pH). A maioria dos corantes são pós diluídos em álcool.
Os corantes nos quais os cátions são os agentes corantes são chamados de básicos (pH maior que 7). Eles podem ser usados para corar microorganismos nas cores vermelho (magenta, safranina), violeta (violeta de metila, tionina), azul (azul de metileno), verde (verde malaquita), marrom (crisoidina) e preto (indulina).
Corantes, nos quais os agentes corantes são ânions, são chamados de ácidos (pH menor que 7). Eles irão corar a amostra de vermelho (eosina), amarelo (picrina) ou preto (nigrosina).
Existe um grupo de corantes neutros (por exemplo, rodamina B), onde tanto os cátions quanto os ânions atuam como agentes corantes.
Cultura viva ou morta
Os métodos de coloração são divididos em dois grupos de acordo com a forma de vida do corpo de prova.
- Coloração vital (durante a vida). Este método de estudo das propriedades dos microrganismos é usado no estudo dos tecidos vivos, o que permite observar os processos vitais dos micróbios. Para esta coloração são utilizados corantes de baixa toxicidade e alto poder de penetração.
- Coloração pós-vital. Esta é a coloração de microorganismos mortos ou mortos. Graças às propriedades tintoriais das bactérias, os microbiologistas determinam sua estrutura. É esta coloração que é mais utilizada.
Gram-positivos e Gram-negativos
São essas características das bactérias que podem ser encontradas nas instruções de vários medicamentos. Este método de estudo das propriedades tintoriais das bactérias é baseado no uso de corante violeta de genciana e fixação de iodo. Esta é a técnica de Hans Christian Gram, um médico dinamarquês que a propôs em 1884. Como resultado dessa coloração, as bactérias são divididas em dois grupos:
- Gram (+) - fica azul(estafilococos e estreptococos).
- Gram (-) - coloração rosa a vermelho (enterobactérias, salmonela, E. coli).
Diferentes resultados de coloração são devidos às diferentes propriedades tintoriais das paredes bacterianas. O método de coloração de Gram ainda é o principal no diagnóstico de algumas doenças infecciosas.
Outras técnicas de coloração
Vamos caracterizar mais alguns métodos amplamente utilizados em bacteriologia.
- Método Ziehl-Nelson - determina a resistência ácida das bactérias. Identifica os agentes causadores da tuberculose e micobacteriose.
- Técnica de Romanovsky-Giemsa - cora bactérias acidófilas (ácido acético e ácido lático) de vermelho e basofílicas (espiroquetas e protozoários) de azul.
- Técnica de Morozov - mancha as bactérias de marrom e torna seus flagelos visíveis.
Esporos podem ser vistos
A coloração fuccina de Tsiel permite que você veja esporos bacterianos. Tendo uma cor rosa após a coloração, eles são claramente visíveis contra o fundo de bactérias azuis. Este método também é uma ferramenta da bacteriologia e é de grande importância prática.
