O termo "microscopia" tem raízes gregas. Na tradução, significa o estudo de objetos usando instrumentos de alta precisão. Recentemente, a fluorescência e a microscopia eletrônica tornaram-se cada vez mais populares.
Resolução
Sob ela, como regra, eles entendem a distância mínima na qual objetos claramente distinguíveis podem ser localizados. O grau de penetração no mundo microscópico, a capacidade de considerar o tamanho do elemento em estudo dependerá da resolução do equipamento. Em alta ampliação, os limites dos objetos podem se fundir. Assim, existem certos limites além dos quais a aproximação de elementos não tem sentido.
Método de microscopia de luminescência: mecanismo
Quando a energia absorvida por uma substância é convertida em radiação visível, ocorre um brilho. Chama-se luminescência. Esse fenômeno se deve ao fato de algumas substâncias, sob a influência da luz, começarem a emitir raios com comprimento de onda diferente (geralmente grande). Além disso, alguns objetos que, sob iluminação normal, possuem certacor, sob a influência do ultravioleta mudam de cor.
Especificidades
Um objeto que não pode ser visto sob luz ultravioleta pode emitir um brilho intenso se for tratado com uma substância especial. Nele, os elementos brilham em cores diferentes no escuro. A força da radiação é diferente, mas, via de regra, é pequena. A este respeito, a microscopia de fluorescência é eficaz em uma sala escura. Ao utilizar este tipo de estudo, o objeto é visto na luz que ele próprio emite. A composição química dos tecidos, células afetará a qualidade do estudo. A microscopia de fluorescência é considerada um estudo histoquímico até certo ponto.
Classificação
A microscopia de fluorescência pode ser primária ou secundária. Neste último caso, o objeto é processado com compostos especiais que dão brilho. A microscopia fluorescente primária é baseada na capacidade do próprio elemento de emitir luz.
Equipamento
A microscopia de fluorescência é realizada usando uma variedade de dispositivos. Seu principal elemento é o iluminador. Está equipado com uma lâmpada UV. Além disso, os dispositivos usam um conjunto de filtros. Em alguns dispositivos, existem muitas configurações diferentes. Dependendo de qual cor é usada para excitar a luminescência - ultravioleta ou azul, um filtro apropriado é colocado entre a fonte de luz e o objeto em estudo. Como o brilho de um elemento microscópico é energeticamente mais fraco que a luz excitante, ele será capturado apenas sob uma condição. O excesso de raios da fonte deve ser cortado por um filtro verde-amarelo. Ele está localizado na ocular do dispositivo. O efeito mais pronunciado da luminescência será quando o filtro cortar completamente os raios que emanam da fonte de luz.
Em que consiste uma instalação de luz visível? Ele contém uma fonte de luz brilhante e um microscópio biológico. Um filtro azul-violeta é colocado entre o espelho do aparelho e a lâmpada. Pode ser FS-1, UFS-3 e assim por diante. O filtro amarelo é colocado na ocular do microscópio. Com a ajuda deles, a luz azul-violeta incide sobre o objeto. Excita a luminescência. Mas essa luz pode interferir na visão do brilho. Portanto, no caminho para o olho, é cortado por um filtro amarelo. A iluminação é definida de acordo com o método Koehler, com uma exceção. O diafragma do condensador deve estar totalmente aberto. Ao examinar, é importante usar um óleo de imersão não fluorescente. Para reduzir seu próprio brilho, adiciona-se nitrobenzeno (2-10 gotas / 1 g).
Microscopia de luminescência: aplicações em microbiologia
Os benefícios deste tipo de estudo são:
- Capacidade de geração de imagens em cores.
- Elementos auto-emissores de alto contraste em um fundo preto.
- Detecção e localização de certos tipos de vírus e micróbios.
- A capacidade de estudar transparente e opacoorganismos vivos.
- Estudo dos processos vitais em sua dinâmica.
Deve-se dizer também que a microscopia luminescente contribui para o desenvolvimento dos melhores métodos de histo e citoquímica, diagnóstico expresso.
